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染料法熒光定量PCR試劑盒

染料法熒光定量PCR試劑盒

簡要描述:染料法熒光定量PCR試劑盒實時熒光定量PCR產品和工具于miRNA和 ncRNA研究,為每個環節提供分析,產品和服務.根據您的不同需求提供服務和產品,點擊查看所有實時定量PCR的定制探針和引物。

產品型號:

所屬分類:PCR試劑盒

更新時間:2020-12-17

詳細說明:

染料法熒光定量PCR試劑盒

產品及特點 

實時熒光定量 PCR(也稱為定量 PCR 或 qPCR)是使用聚合酶鏈式反應 (PCR) 進行的核酸同步擴增和檢測/定量的方法。qPCR 是一種可支持您研究應用的一種多用途的強大工具。查找的實時熒光定量 PCR 預混液、試劑和試劑盒,推動您的實驗進展,為此本公司開發了簡單快捷的鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR檢測試劑盒。

產品優勢:

1.隨時可用。

2.優化的緩沖液可增強特異性并減少引物二聚體的形成。

3.高靈敏度,特異性和可靠性。

4.為不同的qPCR儀器提供了被動參考染料。

 

它具有下列特點:

1. 染料法熒光定量PCR試劑盒即開即用,用戶只需要提供病毒樣品。

2. 根據鮑皰疹樣病毒保守序列設計的專一性引物,與相關病毒無交叉反應。

3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應。

4. 一管式熒光定量 PCR 檢測,避免后續污染。

5. 本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應體系的熒光定量 PCR。

6. 本產品只適用于科研,不能用于臨床診斷。 

 

規格及成分

成分

編號

十孔盒包裝

2×qPCR MagicMix

A

500μL(棕色管)

熒光 PCR 模板稀釋液

B

1 mL(黃蓋)

鮑皰疹樣病毒PCR 引物混合物

C

100μL(白蓋)

鮑皰疹樣病毒 PCR 陽性對照(1×10E8 拷貝/μL)

D

50μL(紅蓋)

DNA 病毒裂解液(試用裝)

E

15 次(9 mL)

使用手冊

F

1 份

運輸及保存 低溫運輸,-20℃保存,有效期一年。

自備試劑 DNA 模板、10×ROX(根據機型決定,具體見使用方法)。

使用方法

一、稀釋 PCR 陽性對照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)

1. 注意:由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的 DNA 段作為陽性對照。

2. 標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。

3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。

4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

5. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

6. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

7. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

二、樣品DNA的制備

8. 如果有N個樣品,必須設置N+2個提取,多出的一個是PC(樣品制備陽性對照),一個是NC(樣品制備陰性對照)??梢杂?10μL上步制備的PCR 陽性對照的第4號(濃度為 1×10E4 拷貝/μL,10μL相當于1萬拷貝)或第5號(濃度為1×10E5拷貝/μL,10μL 相當于10萬拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品,則PC和NC的體積也必須是200μL。

9. 用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場上大多數病毒DNA提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的一管式病毒DNAout 或其升級版柱式病毒DNAout。本試劑盒免費贈送15次一管式病毒DNAout。

三、設置qPCR反應(20μL體系,在樣品制備室進行)

10. 如果只做1次重復,則標記N+9個PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個

樣品,1個用于PCR陰性對照,6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復,則反應設置數量相應增加2或3倍。

11. 在標記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加):

成分

樣品管

N+2 個

PCR 陰性

對照管

PCR 陽性

對照管(2-7 管)

2×qPCR MagicMix

(棕色管)

10 μL

10 μL

各 10 μL

鮑皰疹樣病毒 PCR

引物混合液(白蓋)

2 μL

2 μL

各2 μL

自備 10×ROX (見注)

2 μL

2 μL

2 μL

N+2 待測樣品 DNA 模板

6 μL

不加

不加

第 7 步所得 PCR 陽性對照稀釋液(2-7 號)

不加

不加

各 6μL(2 號樣到

2 號管,3 號樣到 3

號管…)

注:僅 ABI7500、7700 和 7900 儀器需要使用 ROX 作為對照,其他熒光PCR儀器(如 iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene3000、RotorGene 6000 和 LightCycler480)不需要使用 ROX,則用水替代。

12. 蓋上蓋子后上機,按下面參數進行PCR(具體PCR參數可以根據儀器不同而自行優化)。

過程

溫度

時間

預變性

92

5 分鐘

PCR 反應(35 個循環)

94

60 秒

50

60 秒

72℃

60 秒

13. 數據采集

具體操作按所用儀器推薦的流程進行。本產品中所含的熒光染料在不結合 DNA 時,大吸收光譜在 471 nm,結合 DNA 時的大吸收光譜在 500 nm,大發射光譜在 530 nm。信號采集可以設置在復性或延伸步驟。

四、數據處理

14. 如果把本試劑盒用于定量檢測,則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制標準曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標準曲線上推算出樣品 DNA 濃度的log 值,再推算出其濃度。

15. 如果把本試劑盒用于定性檢測,只判斷陽性或陰性,則陰性對照 Ct 必須大于或等于 40。陽性對照必須有熒光對數增長,有典型擴增曲線,Ct 值應該小于或等于30。對待測樣品,如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性,如果小于或等于 35 則為陽性。如果在 35-40 之間,則重復一次。重復實驗的 Ct 值如果大于或等于 40 則為陰性,如果小于 40,則為陽性。

 

 



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